（二）免疫原的选择、免疫程序和卵黄抗体的采集

1.免疫原的选择

实践证明，选择具有良好反应原性和免疫原性的抗原，是制备优质抗血清的基础。而制备优良抗原的关键是选择优良的菌（毒）株，所以应挑选形态、生化特性、血清学与抗原性、毒力等具有典型性的菌（毒）株作为抗原制造用毒株。

通常使用组织灭活苗。选择40～50日龄spf鸡，用通过spf鸡传代的野毒滴鼻、点眼，每只鸡接种0.2～0.3毫升，在48～72小时死亡的鸡，无菌采集其法氏囊，并进行病变观察，将病变典型的法氏囊低温保存备用。取10克病料加100毫升0.5%甲醛生理盐水，匀浆、冻融、过滤，滤液加8%甘油，置于37c条件下灭活18～24小时，即为水剂灭活苗，也可加白油等佐剂，制成油乳剂灭活苗。制备好的疫苗要进行无菌检验，取灭活苗0.5毫升接种于普通琼脂斜面及厌氧肉汤培养基各1支，于37c培养48小时，应无菌生长。此外，要先进行安全试验及保护试验，经无菌检验合格的灭活苗，给40～50日龄spf鸡或未经相应疫苗免疫过的健康鸡，肌内注射、滴鼻或点眼，接种0.3～0.5毫升，观察半个月，无发病者可用1∶10强毒0.5毫升/只攻毒，观察10～14天，无发病者为安全有效。

2.免疫程序

首次免疫，每只肌内注射1毫升，经7～10天后进行第二次免疫，每只2毫升，二免7天后，用琼脂扩散方法测定卵黄抗体效价，如已达到1∶64以上，即可收集高免蛋，如效价不高，可隔7～10天进行第三次加强免疫。

3.卵黄抗体的采集

高免蛋用0.1%新洁尔灭溶液浸泡5分钟，洗涤干净，放入无菌室晾干备用。无菌操作，打破蛋壳，分离蛋黄。收集的蛋黄置于无菌的组织匀浆器中，加等量灭菌生理盐水，每毫升加入青霉素、链霉素各1000单位，硫柳汞0.01%，匀浆、过滤，分装于消毒瓶内，4c冷藏备用。